蛋白酶K在原位雜交技術中通常用于雜交前的處理,它具有消化包圍靶DNA蛋白質的作用,以增加探針與靶核酸結合的機會提高雜交信號。但蛋白酶K的濃度過高、消化時間過長或孵育溫度過高時都會對細胞的結構有一定的破壞,導致組織切片的脫落細胞核的消失,從而影響雜交結果。EDTA緩沖液可以替代蛋白酶K的作用解決上述出現的問題,并能達到理想的染色效果。
蛋白酶K的用途及應用:
1.蛋白酶K可用于質?;蚧蚪MDNA、RNA的分離,是DNA提取的重要試劑;
2.亦可裂解病毒釋放核酸,消除核酸分解酶(RNase)以防止病毒的RNA降解。并且可以滅活病毒,讓病毒的蛋白變性,失去活性而“死掉”,不再有傳染性,提高運輸和檢測階段的安全性;
3.同時蛋白酶K也能夠應用到皮革工業、肉類嫩化、滅活生活以及工業用水中的細菌,優點是消毒劑本身無害,而且不產生有害消毒產物,所以這是一種高效環保的方法。
蛋白酶K的存放方法:
保存:保存在-20℃冰箱里,避免反復凍融,有效保證12月。
使用方法:孵育溫度為55至65℃,理想孵育溫度為58℃,孵育時間為15分鐘至48小時;理想孵育時間為2小時。